"Скайбиохим". Уникальная технология производства рАФП
ООО «СкайБиоХим» разработало уникальную технологию производства рекомбинантного альфа-фетопротеина (рАФП) – белка, близкому к главному белку сыворотки крови взрослых - сывороточному альбумину.
Альфа-фетопротеин (АФП) является онкофетальным белком человека, обладающим сродством к рецептору АФП и подвергающегося рецептор опосредованному эндоцитозу. имеет широкий спектр применений в медицине, например для исследований в области лечения онкологии: АФП способен активировать ген апоптоза и запускать механизм запрограммированной гибели раковой клетки.
Главным преимуществом разработанной технологии является то, что при производстве рАФП не используется человеческий материал (пуповинная, плацентарная и абортная кровь, полученная при медицинских абортах и родах), что позволяет решить проблемы этического плана, снизить вероятность осложнений при применении препаратов на его основе, а также существенно повысить доступность этих препаратов за счет не ограниченного доступа к сырью.
На основе синтеза рекомбинантной плазмидной ДНК, содержащей ген АФП человека под контролем регулируемого промотора, получен штамм дрожжей Pichia pastoris, осуществляющий синтез и секрецию в растворимой форме АФП, обладающего активностью аналогичной сывороточному АФП человека. Данный штамм задепонирован в БРЦ ВКПМ. Разработана технология культивирования штамма, позволяющая получать до 100 мг рАФП на 1 литр культуральной жидкости.
К настоящему моменту наработано свыше 10 г очищенного рАФП.
Были проведены клеточные испытания полученного белка для проверки его активности и связывания с рецепторами клеток аденокарциномы молочной железы человека линии MCF7. Для этого получали ФИТЦ-производные белка (АФП-FITC) по известной методике [1]. Лимфоциты из крови получали по методу Boyum [2]. Было показано, что АФП-FITC эффективно связывается с поверхностью (+4оС) и интернализуется (+37оС) клетками линии MCF7, экспрессирующими рецептор АФП, в то же время он не связывается и не интернализуется лимфоцитами крови человека, не несущими рецептор АФП.
В настоящий момент идет активная наработка субстанции для регистрации и выпуска первого отечественного рекомбинантного альфа-фетопротеина человека.
1. Green F.J. // Sigma-Aldrich Handbook of Stains, Dyes and Indicators. 1990. P. 377.
2. Boyum A. Isolation of mononuclear cells and granulocytes from human blood, isolation of mononuclear cells by one centrifugation, and of granulocytes by combining centrifugation and sedimentation at 1g. // Scand. J. Clin. Lab. Invest. 1968. V. 97. P. 77–89.